Unu di i vantaghji principali di a cultura cellulare hè a capacità di manipulà a chimica fisica di a ripruduzzione cellulare (vale à dì temperatura, pH, pressione osmotica, tensione O2 è CO2) è l'ambiente fisiulogicu (ie cuncentrazione d'hormone è nutriente).In più di a temperatura, l'ambiente di cultura hè cuntrullatu da u mediu di crescita.
Ancu l'ambiente fisiulogicu di a cultura ùn hè micca chjaru cum'è u so ambiente fisicu è chimicu, una megliu comprensione di i cumpunenti di serum, l'identificazione di i fatturi di crescita necessarii per a proliferazione, è una megliu comprensione di u microambientu di e cellule in cultura.(Ie interazzione cellula-cellula, diffusione di gas, interazzione cù a matrice) permette avà à certe linee di cellula à cultivà in media senza serum.
1.L'ambiente di a cultura affetta a crescita cellulare
Per piacè nutate chì e cundizioni di a cultura cellulare sò diffirenti per ogni tipu di cellula.
E cunsequenze di deviazione da e cundizioni di cultura necessarie per un tipu di cellula particulari varienu da l'espressione di fenotipi anormali à u fallimentu cumpletu di a cultura cellulare.Per quessa, ricumandemu chì avete familiarizatu cù a linea cellulare chì vi interessa è seguità strettamente l'istruzzioni furnite per ogni pruduttu chì utilizate in u vostru esperimentu.
2.Precauzioni per creà un ambiente di cultura cellulari ottimisatu per e vostre cellule:
Media di cultura è serum (vede sottu per più infurmazione)
Livelli di pH è CO2 (vede quì sottu per più infurmazione)
Cultivate u plasticu (vede sottu per più infurmazione)
Temperature (vede quì sottu per più infurmazione)
2.1 Media Culturale è Serum
U mediu di cultura hè a parte più impurtante di l'ambienti di cultura, perchè furnisce i nutrienti, i fatturi di crescita è l'hormone necessarii per a crescita di e cellule, è regula u pH è a pressione osmotica di a cultura.
Ancu s'è l'esperimenti iniziali di cultura cellulare sò stati realizati cù media naturali ottenuti da estratti di tissuti è fluidi di u corpu, a necessità di standardizazione, a qualità di i media, è a dumanda aumentata hà purtatu à u sviluppu di i media definitivi.I trè tippi basi di media sò media basali, media di serum ridutta è media senza serum, è anu diverse esigenze per a supplementazione di serum.
2.1.1 Mediu basicu
Milieu de culture cellulaire Gibco
A maiò parte di e linee cellulari crescenu bè in i media basi chì cuntenenu aminoacidi, vitamini, sali inorganici è fonti di carbonu (cum'è glucose), ma sti formulazioni basi di media deve esse supplementate cù serum.
2.1.2 Mediu di serum ridutta
Flacone cù Gibco Low Serum Medium
Un'altra strategia per riduce l'effetti avversi di u serum in esperimenti di cultura cellulare hè di utilizà medii ridotti di serum.U mediu di serum ridutta hè una formula media basica ricca di nutrienti è fattori derivati da l'animali, chì ponu riduce a quantità di serum necessariu.
2.1.3 Mediu senza serum
Bottiglia cù mediu Gibco senza serum
Mediu senza serum (SFM) elude l'usu di serum animale rimpiazzendu u serum cù formulazioni di nutrimentu è hormone adattate.Parechje culturi primarie è linee cellulari anu formulazioni medii senza serum, cumpresa a linea di produzzione di proteine recombinante di l'ovaru di Hamster Chinese (CHO), diverse linee di cellule di hibridoma, linee d'insetti Sf9 è Sf21 (Spodoptera frugiperda), è ancu per l'ospite per a produzzione di virus. (per esempiu, 293, VERO, MDCK, MDBK), etc. Unu di i vantaghji principali di l'usu di un mediu senza serum hè a capacità di fà u mediu selettivu per i tipi di celluli specifichi, selezziunate una cumminazione adattata di fatturi di crescita.A tavula seguente lista i vantaghji è i disadvantages di i media senza serum.
Vantage
Aumentà a chiarità
Prestazione più consistente
Purificazione più faciule è trasfurmazioni downstream
Evaluà accuratamente a funzione cellulare
Aumentà a produtividade
Un megliu cuntrollu di reazzione fisiologica
Rilevazione di i media cellulari rinfurzata
Svantaghju
Requisiti specifichi di formula media di u tipu di cellula
Bisogna una purezza di reagenti più altu
Slowdown in crescita
2.2.1 Livellu di pH
A maiò parte di e linee di cellula di mammiferi nurmali crescenu bè à pH 7,4, è e differenze trà e diverse linee di cellula sò chjuche.In ogni casu, certi linii di cellula trasfurmati sò stati dimustrati per crescenu megliu in un ambiente ligeramente acidicu (pH 7.0 - 7.4), mentre chì certi linii celluli di fibroblasti normali preferanu un ambiente ligeramente alkaline (pH 7.4 - 7.7).E linee di cellule d'insetti cum'è Sf9 è Sf21 crescenu megliu à pH 6,2.
2.2.2 Livellu di CO2
U mediu di crescita cuntrolla u pH di a cultura è tampone e cellule in a cultura per resiste à i cambiamenti di pH.Di solitu, stu buffering hè ottenutu cuntenendu buffers organici (per esempiu, HEPES) o CO2-bicarbonate.Perchè u pH di u mediu dipende da u dilicatu equilibriu di diossidu di carbonu dissolutu (CO2) è bicarbonate (HCO3-), i cambiamenti in u CO2 atmosfericu cambianu u pH di u mediu.Per quessa, quandu s'utilice un mediu buffered cun un buffer basatu in CO2-bicarbonate, hè necessariu d'utilizà CO2 esogenu, soprattuttu quandu cultivà e cellule in platti di cultura aperta o cultivà e linee di cellule trasformate à alta concentrazione.Ancu s'è a maiò parte di i circadori usanu di solitu 5-7% CO2 in l'aria, a maiò parte di l'esperimenti di cultura di cellula generalmente utilizanu 4-10% CO2.In ogni casu, ogni mediu hà una tensione CO2 cunsigliata è cuncentrazione di bicarbonate per ottene u pH currettu è a pressione osmotica;per più infurmazione, fate riferimentu à l'istruzzioni di u fabricatore mediu.
2.3 Cultivazione di plastica
I plastichi di cultura cellulare sò dispunibili in una varietà di forme, dimensioni è superfici per adattà à diverse applicazioni di cultura cellulare.Aduprate a guida di a superficia plastica di a cultura cellulare è a guida di u containeru di a cultura cellulare quì sottu per aiutà à sceglie u plasticu adattatu per a vostra applicazione di cultura cellulare.
Vede tutti i plastichi di cultura cellulare Thermo Scientific Nunc (ligame publicitariu)
2.4 Temperature
A temperatura ottima per a cultura di cellula dipende in gran parte di a temperatura di u corpu di l'ospiti da quale i celluli sò isolati, è in una minore misura di i cambiamenti anatomichi in a temperatura (per esempiu, a temperatura di a pelle pò esse più bassu di quella di u musculu scheleticu). ).Per a cultura di cellula, u surriscaldamentu hè un prublema più seriu cà u surriscaldamentu.Per quessa, a temperatura in l'incubatore hè generalmente stabilita ligeramente sottu à a temperatura ottima.
2.4.1 Temperature ottimali per diverse linee di cellule
A maiò parte di e linee di cellule umane è mammiferi sò manteni à 36 ° C à 37 ° C per una crescita ottima.
I celi di l'insetti sò cultivati à 27 ° C per u crescita ottimali;criscinu più lentu à e tampiratura più bassu è a temperatura trà 27 ° C è 30 ° C.Sopra à 30 ° C, a vitalità di e cellule d'insetti diminuite, ancu s'ellu torna à 27 ° C, e cellule ùn si ricuperanu.
E linee di cellule aviarie necessitanu 38,5 ° C per ghjunghje à a crescita massima.Ancu s'elli ponu esse manteni à 37 ° C, crescenu più lentamente.
I linii cellulari derivati da animali di sangue friddu (cum'è anfibi, pesci d'acqua fridda) ponu tollerà una larga gamma di temperatura di 15 ° C à 26 ° C.
Tempu di Postu: Feb-01-2023