A cuntaminazione di i culturi di cellula pò facilmente diventà u prublema più cumuna in i laboratorii di cultura di cellula, à volte causannu cunsequenze assai gravi.I contaminanti di a cultura cellulare ponu esse divisi in dui categurie, contaminanti chimichi cum'è impurità media, serum è acqua, endotossine, plastificanti è detergenti, è contaminanti biologichi cum'è batteri, muffa, lieviti, virus, infezioni croce di mycoplasmas.Cuntaminatu da altre linee di cellule.Ancu s'ellu hè impussibile di eliminà cumplettamente a contaminazione, a so freccia è a gravità pò esse ridutta per capiscenu bè a so fonte è seguitate boni tecniche asettiche.
1.Questa sezione delinea i principali tipi di contaminazione biologica:
Cuntaminazione bacteriana
Contaminazione di muffa è virus
Cuntaminazione da Mycoplasma
Cuntaminazione di levitu
1.1 Cuntaminazione bacteriana
I batteri sò un grande gruppu di microorganismi unicellulari omnipresenti.Di solitu sò solu uni pochi microni di diametru è ponu vene in una varietà di forme, da sfere à bastone è spirali.Per via di a so ubiquità, di a dimensione è di a rapida crescita di a crescita, i battìri, cù i leviti è i muffa, sò i contaminanti biologichi più cumuni in a cultura cellulare.
1.1.1 Detection of Bacterial Contamination
A contaminazione bacteriana hè facilmente rilevata da l'ispezione visuale di a cultura in pochi ghjorni da esse infettata;
I culturi infettati sò generalmente nuvole (vale à dì, turbid), à volte cù una film fina nantu à a superficia.
A gocce bruschi in u pH di u mediu di cultura hè ancu spessu scontru.
Sutta un microscopiu di bassa putenza, i battìri appariscenu cum'è minuscule granuli muvimenti trà e cellule, è l'osservazione sottu un microscopiu d'alta putenza pò risolve e forme di i batteri individuali.
1.2 Contaminazione di muffa è virus
1.2.1 Contaminazione di Mold
I muffa sò microorganismi eucarioti di u regnu fungicu chì crescenu in forma di filamenti multicellulari chjamati ife.I riti cunghjuntivi di sti filamenti multicellulari cuntenenu nuclei genetically identici chjamati culunie o miceliu.
Simile à a contaminazione di levitu, u pH di a cultura ferma stabile durante a fase iniziale di a contaminazione è poi aumenta rapidamente cum'è a cultura diventa più severamente infettata è diventa nuvola.Sutta u microscopiu, u miceliu hè generalmente filamentu, à volte cum'è densi gruppi di spori.I spori di parechji muffa ponu sopravvive in ambienti estremamente duri è inospitali durante a so fase di dorme è sò attivati solu quandu si trovanu e cundizioni di crescita ghjusta.
1.2.2 Cuntaminazione Virus
I virus sò agenti infettivi microscòpichi chì ripiglià a machina di a cellula ospiti per a ripruduzzione.A so dimensione estremamente chjuca li rende difficiuli di detectà in a cultura è di caccià da i reagenti utilizati in i laboratorii di cultura cellulare.Siccomu a maiò parte di i virus anu esigenze assai strette per i so ospiti, di solitu ùn affettanu micca negativamente i culturi di cellule di spezie altru ch'è l'ospiti.
In ogni casu, l'usu di e culturi di cellule infettate da virus pò esse un risicu seriu per a salute di u persunale di u laboratoriu, soprattuttu se e cellule umane o primate sò cultivate in u laboratoriu.
L'infezzione virali in i culturi di cellule pò esse rilevata da microscopia elettronica, immunostaining cù un settore di anticorpi, ELISA, o PCR cù primers virali appropritati.
1.3 Cuntaminazione di Mycoplasma
I micoplasmi sò battìri simplici senza pareti celulari, è sò pensati chì sò l'organisimi più chjuchi chì si replicanu.A causa di a so dimensione estremamente chjuca (in solitu menu di 1 micron), i micoplasmi sò difficiuli di detectà finu à ch'elli righjunghjinu densità estremamente elevate è causanu a deteriorazione di i culturi di cellule;Finu à quì, ùn ci hè di solitu un signu evidenti di infezzjoni.
1.3.1 Detection of mycoplasma contamination
Certi micoplasmi à crescita lenta ponu persiste in i culturi senza pruvucà a morte di e cellule, ma alteranu u cumpurtamentu è u metabolismu di e cellule ospiti in i culturi.
L'infezzione cronica da micoplasma pò esse carattarizata da a riduzzione di a proliferazione cellulare, a diminuzione di a densità di saturazione è l'agglutinazione in a cultura di sospensione.
Tuttavia, l'unicu modu affidabile per detectà a contaminazione da micoplasma hè di pruvà a cultura regularmente utilizendu tintura fluorescente (per esempiu, Hoechst 33258), ELISA, PCR, immunostaining, autoradiografia o teste microbiche.
1.4 Cuntaminazione di levitu
I lieviti sò eucarioti unicellulari di u regnu fungicu, chì varienu in grandezza da uni pochi microni (di solitu) à 40 microni (raramente).
1.4.1Deteczione di a contaminazione di levitu
Cum'è cù a contaminazione bacteriana, i culturi cuntaminati da u levitu pò esse nuvole, soprattuttu se a contaminazione hè in un stadiu avanzatu.U pH di i culturi cuntaminati cù levitu cambia assai pocu finu à chì a contaminazione diventa più severa, in quale stadiu u pH di solitu aumenta.Sutta u microscopiu, u levitu si prisenta cum'è particeddi ovoidi o sferichi individuali è pò pruduce particelle più chjuche.
2.Cross infezzione
Ancu s'ellu ùn hè micca cumunu cum'è a contaminazione microbiana, a contaminazione cruciata estensiva di parechje linee di cellule cù HeLa è altre linee di cellule in crescita rapida hè un prublema chjaramente definitu cù cunsequenze gravi.Ottene linee cellulari da banche di cellula reputable, verificate regularmente e caratteristiche di e linee cellulari, è utilizate boni tecniche asettiche.Queste pratiche vi aiutanu à evità a contaminazione incruciata.L'impronta digitale di l'ADN, a cariotipia è l'isotipia ponu cunfirmà s'ellu ci hè una contaminazione incruciata in a vostra cultura cellulare.
Ancu s'ellu ùn hè micca cumunu cum'è a contaminazione microbiana, a contaminazione cruciata estensiva di parechje linee di cellule cù HeLa è altre linee di cellule in crescita rapida hè un prublema chjaramente definitu cù cunsequenze gravi.Ottene linee cellulari da banche di cellula reputable, verificate regularmente e caratteristiche di e linee cellulari, è utilizate boni tecniche asettiche.Queste pratiche vi aiutanu à evità a contaminazione incruciata.L'impronta digitale di l'ADN, a cariotipia è l'isotipia ponu cunfirmà s'ellu ci hè una contaminazione incruciata in a vostra cultura cellulare.
Tempu di Postu: Feb-01-2023